2021_12_28

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-======= 各検索アルゴリズムの検討 ======== 
- 
- 
-====== blastnを用いた検索 ====== 
- 
-DBの作成 
- 
-  makeblastdb -in SSU_LSU_ITS_mito_plastid.maskadapters.desc.fa -dbtype nucl 
-   
-検索 
- 
-  time blastn -db SSU_LSU_ITS_mito_plastid.maskadapters.desc.fa -query group4-16S-Sanshiroike2.fasta -num_threads 1 -out group4-16S.fasta.blastn 
-    real time: 0:42.16 (42.16 s) 
-    system time: 0.35 s 
-    user time:40.96 s 
-    max memory: 505620 KB 
- 
- 
-====== vsearchを用いた検索 ====== 
- 
-DBファイルのダウンロード 
- 
-  scp mizobata.hideaki@m768c.s:/suikou/db/ncbi/2021-12-01_SSU_LSU_ITS_mito_plastid/SSU_LSU_ITS_mito_plastid.maskadapters.desc.fa . 
-   
-DBファイルのmakeudb 
- 
-  time vsearch -makeudb_usearch SSU_LSU_ITS_mito_plastid.maskadapters.desc.fa -output conbined.udb 
-    real time: 1:41.38 (101.38 s) 
-    system time: 2.17 s 
-    user time:98.97 s 
-    max memory: 1381728 KB 
- 
-vsearchによるグローバル検索 
- 
-  time vsearch --usearch_global 2021nanopore/group4-16S-Sanshiroike2.fasta --db conbined.udb --id 0.7 --blast6out group4-16S-conbined 
-    real time: 0:51.12 (51.12 s) 
-    system time: 5.07 s 
-    user time:579.42 s 
-    max memory: 1664640 KB 
-   
-Megan用に、拡張子等を書き換える 
- 
-  awk -F'\t' '{OFS="\t"; $12=$3; print $0}' group4-16S-conbined > group4-16S-conbined.blastn 
-   
-仮想サーバからログアウト 
- 
-  exit 
-   
-先ほどのファイルをローカルサーバに持ってくる 
- 
-  scp -r mizobata@192.168.251.65:/home/mizobata/vsearch/group4-16S-conbined.blastn . 
-   
- 
-====== bwaのインストール ====== 
- 
-bwa用フォルダの作成 
- 
-  mkdir analysis 
-   
-bwaのダウンロード 
- 
-  wget https://sourceforge.net/projects/bio-bwa/files/bwa-0.7.17.tar.bz2 
-   
-ファイルの解凍 
- 
-  bunzip2 bwa-0.7.17.tar.bz2 
-  tar xvf bwa-0.7.17.tar 
-   
-フォルダの移動 
- 
-  cd bwa-0.7.17/ 
- 
-zlib-develのインストール 
- 
-  sudo yum install zlib-devel 
-   
-make 
- 
-  make 
-   
-====== bwaを用いた検索 ====== 
- 
-DBのダウンロード 
- 
-  scp mizobata.hideaki@m768c.s:/suikou/db/ncbi/2021-12-01_SSU_LSU_ITS_mito_plastid/SSU_LSU_ITS_mito_plastid.maskadapters.desc.fa . 
-   
-DBのindexing。 
- 
--p:アウトプットファイル名の指定。 
- 
--a:indexing法の指定。is,bwtswが指定可能。isの方が簡潔で速いが、大容量DBには指定できない。 
- 
-  time bwa-0.7.17/bwa index -p ./bwadb -a bwtsw SSU_LSU_ITS_mito_plastid.maskadapters.desc.fa 
-    real time: 29:23.56 (1763.56 s) 
-    system time: 4.63 s 
-    user time:1751.60 s 
-    max memory: 2355196 KB 
- 
-bwaを用いた検索 
- 
-  time bwa-0.7.17/bwa mem bwadb group4-16S-Sanshiroike2.fasta > group4-16S-Sanshiroike2.sam 
-    real time: 0:07.43 (7.43 s) 
-    system time: 1.45 s 
-    user time:4.24 s 
-    max memory: 2753976 KB 
- 
-Meganで読み込めるよう、awkで改変 
- 
-  cat group4-16S.sam|grep -v "^@"|awk '$3!="*" && old!=$1{old=$1; print $0}'|awk '{print $1"\t"$3"\t100\t100\t0\t0\t1\t100\t1\t100\t0\t100"}' > group4-16S.sam.blastn 
- 
-ログアウト 
- 
-  exit 
- 
-先ほどのファイルをローカルへ持ってくる 
- 
-  scp -r mizobata@192.168.251.65:/home/mizobata/analysis/group4-16S.sam.blastn . 
- 
-====== bwa-mem2のインストール ====== 
- 
-mem2のダウンロード 
- 
-  wget https://github.com/bwa-mem2/bwa-mem2/releases/download/v2.0pre2/bwa-mem2-2.0pre2_x64-linux.tar.bz2 
-   
-解凍 
- 
-  bunzip2 bwa-mem2-2.0pre2_x64-linux.tar.bz2 
-  tar xvf bwa-mem2-2.0pre2_x64-linux.tar 
-   
-ディレクトリの変更 
- 
-  cd bwa-mem2-2.0pre2_x64-linux/ 
-   
-実行 
- 
-  ./bwa-mem2 
-    Please verify that both the operating system and the processor support Intel(R) X87, CMOV, MMX, FXSAVE, SSE, SSE2, SSE3, SSSE3, SSE4_1, SSE4_2, MOVBE, POPCNT, F16C, AVX, FMA, BMI, LZCNT and AVX2 instructions. 
-     
-⇒このPCではCPUの規格が合わなかった.... 
- 
-   
-====== Meganを用いた各結果の比較 ====== 
- 
-1. Meganを開く。 
- 
-2. File ⇒ Import from BLAST 
- 
-3. Importファイルには検索結果ファイルを指定。FormatはBlastTAB,タイプはBlastN。 
- 
-4. Taxonomy ⇒ Load MeganMapDB mapping File ⇒ megan-nucl-Jan201.dbを指定し、Apply。 
- 
-5. 以上を各結果について行う。 
- 
-6. File ⇒ Compareで対象結果をすべて選択し、比較する。 
- 
-bwa(橙),vsearch(青),blastn(桃)の結果比較(Genusレベル)。 
- 
-{{ :スクリーンショット_2021-12-28_195627.png |}} 
- 
  
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